上海纖檢凱氏定氮儀實驗過程注意事項討論 

( 1) 樣品應是均勻的。

固體樣品應預先研細混 勻,液體樣品應振搖或攪拌均勻。固體樣品一般取樣范圍為 0. 20 ～ 2. 00g ; 半固 體試樣一般取樣范圍為 2. 00 ～ 5. 00g ; 液體樣品取 樣 10. 0 ～ 25. 0mL( 約相當?shù)?30 ～ 40mg ) 。若檢測液 體樣品,結果以 g /100mL表示。

 ( 2) 樣品放入定氮管內(nèi)時,不要沾附管頸上。

萬一沾附可用少量水沖下,以免樣品消化不完全,結 果偏低,或者用濾紙包裹好一起投入消化,濾紙影響 通過空白扣除。若樣品不易消化至澄清透明,可將 消化液稍冷卻,加入數(shù)滴過氧化氫后,再繼續(xù)加熱消 化至完全。

 ( 3) 消化時,不要用強火。

應注意消化溫度,用 消解儀最好選擇曲線加熱,防止劇烈反應導致樣品 上沖附著在瓶壁上難以徹底消化。若樣品含糖高或 含脂較多時,注意控制加熱溫度,以免大量泡沫噴 出,造成樣品損失。可加入少量辛醇或液體石蠟,或 硅消泡劑減少泡沫產(chǎn)生。在整個消化過程中保持和 緩的沸騰,使火力集中在消化管底部,以免附著在壁 上的蛋白質(zhì)在無硫酸存在的情況下, 使氮有損失。 采用海能公司消解爐 SH 220或 SH 520石墨孔內(nèi)加 熱,階段升溫能夠很好地解決此問題。 

( 4) 如硫酸缺少,過多的硫酸鉀會引起氨的損 失,這樣會形成硫酸氫鉀,而不與氨作用。因此,當 硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時,要增 加硫酸的量; 加入硫酸鉀的作用是升高溶液的沸點; 催化劑硫酸銅在有機物全部消化后,溶液顯清澈透 明的藍綠色,可用它來指示消化終點。此外,硫酸銅 還可用做下一步蒸餾時堿性反應的指示劑。過氧化 氫為氧化劑,有助于有機物消化,同時可以消除消化 過程中的氣泡現(xiàn)象。

 ( 5) 向消化管中加入濃堿時,往往出現(xiàn)褐色沉 淀物,這是由于分解促進堿與加入的硫酸銅反應,生 成氫氧化銅,經(jīng)加熱后又分解生成氧化銅的沉淀。 有 時銅 離子 與氨 作用 , 生 成深 藍色 的結 合物 [Cu (NH 3) 4] 2+, 加入氫氧化鈉是否足量,常常影響 整個測定的順利進行。由反應原理可知,當氫氧化 鈉足量時有黑色氧化銅生成而使溶液呈淡黑色; 當 氫氧化鈉量不足時就無黑色氧化銅產(chǎn)生而使溶液呈 淡藍色,所以有無氧化銅顏色存在是判斷氫氧化鈉 是否足量的標志。

 ( 6) 實驗過程中,因蒸餾時反應室的壓力大于 大氣壓力,故可將氨帶出。所以,蒸餾時,蒸氣要發(fā) 生均勻,充足,蒸餾中不得停火斷氣,否則,會發(fā)生倒 吸。傳統(tǒng)凱氏實驗中,停止蒸餾時,由于反應室外層 的壓力突然降低,可使液體倒吸入反應室外層,所 以,操作時,應先將冷凝管下端提離液面并清洗管 口,再蒸一分鐘后關掉熱源。蒸餾是否完全,可用精 密 pH試紙測冷凝管口的冷凝液來測定,中性則說 明已蒸餾完全。一般情況下建議使用半微量法,因 為如果蒸餾失敗的話,半微量法還可繼續(xù)蒸餾,而常量法只好全部重來,費時費力。

 ( 7) 混合指示劑在堿性溶液中呈綠色,在中性 溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴 甲酚綠,可單獨使用 0. 1%甲基紅乙醇溶液。 

( 8) 吸收液也可以用 0. 01mo l /L的酸代替硼 酸,過剩的酸液用 0. 01mo l /L堿液滴定,而以硼酸為 氨的吸收液,可省去標定堿液的操作,且硼酸的體積 要求并不嚴格,亦可免去用移液管,操作比較簡便。 另外,硼酸吸收液的溫度不應超過 40℃,否則氨吸 收減弱,造成檢測結果偏低。可把接收瓶置于冷水 浴中。 

( 9) 硫酸標準溶液配制時,必須將基準無水碳 酸鈉于 270 ～ 300℃灼燒至恒重后稱取所須用量,否 則也會影響蛋白質(zhì)測定結果的準確性。硫酸標準溶 液的濃度,常量法中氫離子濃度取 0. 1mo l /L比較合 適,半微量法中則在 0. 02 ～ 0. 05mo l /L之間比較合 適。